為確保Symmetry色譜柱始終保持理想性能，請遵循以下原則：

a. 保護柱

在進樣器和分析柱之間使用填料化學和顆粒大小都適合的沃特世保護柱。使用匹配的高性能保護柱，是保護主色譜柱而不影響或改變分析分離度的重要措施。保護柱需要根據(jù)樣品污染情況定期更換。當系統(tǒng)背壓穩(wěn)步上升至設定壓力限值時，通常表明需要更換保護柱。突然出現(xiàn)分叉峰也表明需要更換保護柱。

b. 樣品制備

1. 樣品中的雜質往往會污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Oasis™固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak™小柱凈化樣品。

2. 為獲得理想峰形和靈敏度，優(yōu)先選用運行分析時要用的流動相或比它更弱的流動相（有機改性劑含量更低）來制備樣品。

3. 如果樣品不是使用流動相制備的，務必確保樣品、溶劑和流動相可以混溶，以避免樣品和/或緩沖液產生沉淀。用0.2μm濾膜過濾樣品，去除顆粒物質。如果用于溶解樣品的溶劑含有機改性劑（如乙腈、甲醇等），請確保濾膜材料不溶于該溶劑。請聯(lián)系濾膜生產商了解濾膜的溶劑兼容性?；蛘?，可以考慮在8,000 rpm下離心樣品溶液20 min，然后將上清液

轉移至適當?shù)臉悠菲恐小?/span>

c. pH值范圍

Symmetry色譜柱的推薦pH范圍為2~8。表2列出了常用的緩沖液和添加劑。此外，柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖液類型和濃度而有所不同。例如，在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會縮短色譜柱壽命。

表2：在pH 2~8范圍內使用Symmetry色譜柱時的推薦緩沖液。

d. 溶劑

  為了保持理想的色譜柱性能，請使用優(yōu)質的色譜級溶劑。所有水性緩沖液在使用前都必須過濾。推薦使用Pall Gelman Laboratory Acrodisc®過濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑通常會堵塞色譜柱入口篩板的外表面，這會導致操作壓力增大，性能變差。使用前，請將所有溶劑徹底脫氣，避免泵和檢測器中形成氣泡。沃特世還建議使用在線脫氣裝置。運行低壓梯度時，溶劑脫氣尤其重要，因為在梯度運行過程中混合水相溶劑與有機溶劑時可能形成氣泡。

e. 壓力

  Symmetry色譜柱可承受的壓力上限為6,000 psi（400 bar或40 Mpa），但為了盡可能延長色譜柱和系統(tǒng)使用壽命，應避免壓力超過4,000-5,000 psi。

f. 溫度

  為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質速率，Symmetry色譜柱的推薦操作溫度范圍為20℃~45℃。但是，任何高于室溫的溫度都會對色譜柱壽命產生不良影響，色譜柱壽命還會根據(jù)pH和緩沖液條件而有所不同。

IV. 放大/縮小等度方法

  以下公式可在保持線性流速不變的前提下放大或縮小方法，并計算出新方法的上樣量：

如果色譜柱內徑和長度改變：

F2 = F1(r2/r1)²

或

進樣體積1 = 進樣體積₂ (r2/r1)²(L2/L1)

其中: r = 色譜柱半徑(mm)

F = 流速(mL/min)

L = 色譜柱長度(mm)

1 = 原始或參比色譜柱

2 = 新色譜柱

V. 故障排除

  保留時間、分離度或柱壓變化通常是色譜柱污染所致。請參閱“色譜柱清洗、再生和儲存"有關色譜柱故障排除問題的信息，請參閱最新的waters目錄。